Mahmoud Zaky / Merna Abou Selima
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L’integrazione casuale del vettore IVET nel cromosoma del patogeno viene eseguita mediante mutagenesi inserzionale-duplicativa per creare un pool di patogeni ricombinanti (ciò significa che il gene in cui il vettore si è inserito per ricombinazione omologa non viene interrotto). I ricombinanti possono essere selezionati utilizzando la resistenza agli antibiotici, poiché un marcatore aggiuntivo è presente anche sul costrutto IVET integrato. I cloni in pool vengono poi inoculati nel topo. I due tipi principali di strategie di trappola del promotore IVET sono (a) la complementazione della mutazione auxotrofica e (b) l’espressione della resistenza agli antibiotici. Solo i batteri che contengono il marcatore selettivo fuso con un gene trascrizionalmente attivo nell’ospite sono in grado di sopravvivere. Dopo un adeguato periodo di infezione, i batteri che esprimono il marcatore vengono isolati da polmoni, fegato, milza e tessuto mesenterico.
