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A cetoacidose diabética (CAD) é a emergência hiperglicémica mais comum em pacientes com diabetes e é causada pelo excesso de cetonas. Entre o total de corpos cetónicos, o ácido D-3-hidroxibutÃrico (D-3-HB) é o principal, representando quase 78%. Portanto, a deteção do D-3-HB sérico tem sido um marcador de rotina para o diagnóstico da cetoacidose diabética. A deteção por fluorescência é o método mais eficiente, simples de operar, de baixo custo, com monitorização em tempo real e alta sensibilidade. Aqui, duas novas sondas, 4-(2-hidroxibencilen)tiosemicarbazida (1) e 4-(1H-imidazo[4,5-f][1,10]-fenantrolin-2-il)fenol (2), foram sintetizadas e mostraram uma resposta fluorescente OFF-ON peculiar ao D-3-HB em solução aquosa. As sondas 1 e 2 exibiram uma resposta seletiva e sensÃvel ao D-3-HB em relação a outros iões metálicos comuns, aniões e aminoácidos. Além disso, o mecanismo foi confirmado por 1H-NMR e ESI-MS. Além disso, esta sonda 1 foi aplicada com sucesso em bioimagem, demonstrando o seu valor para aplicações práticas em sistemas biológicos.